TurboTEV蛋白酶是一种增强形式的半胱氨酸蛋白酶，含有烟草蚀刻病毒（TEV）N1a蛋白催化片段。它能够高效识别Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly的切割位点，并在Gln与Gly之间进行切割。TurboTEV蛋白酶是一款具有超强特异性和稳定性的限制性蛋白酶，其活性在4°C下得以保持。值得一提的是，它的活性不依赖于特殊缓冲液，可以与目标蛋白的最适合缓冲液一起使用。

本酶的分子量为52kDa，带有GST和His标签，能够通过Ni螯合或谷胱甘肽（GSH）树脂轻松去除剪切标签。

一、来源及活性

Z6·尊龙凯时的TurboTEV蛋白酶来源于大肠杆菌，其活性超过10 Units/µg。在30°C条件下，1单位的TurboTEV蛋白酶可在1小时内裂解3µg对照底物的85%。

二、操作协议

1. 在溶液中裂解

A. 配制新鲜的冰冷透析缓冲液，示例：25mM Tris-HCl (pH 8.0)，150-500mM NaCl，14mM β-巯基乙醇。

B. 稀释目标蛋白样品池

• (a) 使用透析缓冲液将目标蛋白样品稀释至1-2 mg/mL。如果目标蛋白在透析缓冲液中发生聚集，可选择跳过此步骤。
• (b) 留出一小份未切割样品以作分析。如果目标蛋白样品是在镍柱上洗脱，并且与EDTA兼容，可加入EDTA至最终浓度0.5mM。

C. 加入TurboTEV蛋白酶，按照1:100（w/w）的比例添加，即100mg目标蛋白对应1mg TurboTEV蛋白酶。

D. 在4°C下，用透析缓冲液透析过夜（约16小时）。

2. 去除TurboTEV蛋白酶

A. 上柱处理

B. 进行SDS-PAGE分析（可选）

三、产品应用

• 蛋白裂解功能
• 从重组蛋白中去除融合标签
• 蛋白质和肽的纯化

四、常见问题

1. 问：TEV消化反应的缓冲液条件有多重要？是否有可能对TurboTEV的剪切效率造成影响？

答：1mM的DTT是可以的，但不推荐10%的甘油、20mM组氨酸、500mM NaCl或100mM Tris。β-巯基乙醇的功能与DTT类似，加入是可行的。

2. 问：在剪切之前，需要缓冲液交换蛋白吗？

答：这可能是必要的。

五、参考文献

• Hyeok-Jin Ko et al., Appl Envir Microbiol, May 2012; 78:3051-3058
• Jussi J Joensuu et al., Plant Physiology, Feb 2010; 152:622-633
• Neef, Jolanda et al., Applied Microbiology and Biotechnology, 2015; 99:9037-9048

位于美国圣地亚哥的Z6·尊龙凯时，自2003年成立以来，一直致力于生物研究领域的贡献，提供包括免疫学、细胞生物学、分子生物学等多个领域的支援服务，产品涵盖代谢检测试剂盒、ELISA试剂盒、生化试剂、抗生素、核酸酶和蛋白酶等多项产品。