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单克隆和多克隆抗体及抗原选择方法 - Z6·尊龙凯时研讨分析

发布时间:2025-03-15   信息来源:汪莎会

多克隆抗体(polyclonal antibody, pAb)是在免疫动物中使用具有多种抗原决定簇的抗原,从而刺激多个B细胞克隆,产生针对不同抗原表位的多种抗体。所获得的免疫血清实际上是多种抗体的混合物,即多克隆抗体。而单克隆抗体则是由单一B细胞克隆产生,具有高度均一性,仅针对特定抗原表位。这类抗体通常采用杂交瘤技术制备,基于对细胞融合技术的应用,将具备分泌特异性抗体能力的致敏B细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合形成B细胞杂交瘤。

单克隆和多克隆抗体及抗原选择方法 - Z6·尊龙凯时研讨分析

单克隆抗体与多克隆抗体的优缺点

多克隆抗体的优点

1. 多克隆抗体能够放大低表达水平的靶蛋白信号;

2. 可识别多个表位;

3. 对抗原中的微小变化具有更好的容忍性;

4. 能识别与免疫原蛋白质高同源性的蛋白,或从非免疫原物种的组织样品中筛选靶蛋白;

5. 多克隆抗体通常是检测变性蛋白质的首选;

6. 多表位的识别通常可以提供更强的检测能力。

多克隆抗体的缺点

1. 易产生批次间差异;

2. 可能产生大量非特异性抗体,在某些应用中可能导致背景信号;

3. 不适用于探测抗原特定的结构域,因抗血清通常能识别多个结构域。

单克隆抗体的优点

1. 杂交瘤一旦建立,就成为恒定的再生源,所有批次均相同;

2. 切片和细胞染色所造成的背景较低;

3. 具有高特异性,适合用于分析测定中的一抗或检测组织中的抗原,通常背景染色显著较低;

4. 同质性非常高;

5. 单克隆抗体的特异性使其能够高效结合混合物中的抗原。

单克隆抗体的缺点

1. 尽管能产生大量特异性抗体,但可能特异性过强;

2. 经化学处理的抗原较多克隆抗体更容易丧失表位,这可以通过使用同一抗原的多个单克隆抗体进行补偿。

单抗与多抗的选择

当对抗体的特异性要求较高,且需要大剂量或长期使用一致抗体,且应用需求多样(如WB/IP/IF/ICC等),建议选择制备单克隆抗体。相对而言,多克隆抗体特异性较差,且不同批次间会存在差异,因而在特异性和一致性上存在较大限制。因此,使用多克隆抗体进行免疫检测时,更容易出现背景问题,如WB中的杂带或IHC中的背景较深等。尽管存在交叉反应的问题,但由于多克隆抗体能识别多个抗原表位,即便少数抗原表位遭到破坏或抗原构象发生变化,实验结果通常不会受到显著影响。此外,由于多克隆抗体需要较多免疫原,如果免疫原难以制备,则建议选用单克隆抗体。

若对抗体的特异性要求不高,只需进行沉淀和凝集反应的检测性实验或仅进行ELISA检测,则可以选择多克隆抗体。相较于单克隆抗体,多克隆抗体的制备时间较短,首次制备成本低,在某些情况下是一种可行的选择。此外,在相同条件下使用多克隆抗体可提高检测灵敏度,对于丰度较低的蛋白更容易检出。

抗原的选择

抗原选择可涉及天然蛋白、重组可溶蛋白、重组变性蛋白及多肽。抗原质量越高,最终制备高质量抗体的可能性也越大。目前,抗体制备通常采用重组蛋白或多肽作为抗原。重组蛋白作为抗原往往赋予更多抗原决定簇,既有空间表位,也有线性序列表位,对于免疫系统的刺激也更加充分,从而大大提高获取广泛应用抗体的几率。尤其在目标蛋白已证实有修饰或结构复杂的情况下,通常优先选择重组蛋白。

当然,某些情况下必需使用多肽制备,例如针对同源家族某一蛋白的抗体制备,需找到特异性氨基酸合成多肽,或针对某些修饰的抗体,需要在多肽合成阶段定点修饰特定氨基酸。

抗原多肽的选择一般遵循以下原则:1. 尽可能选择位于蛋白表面的序列;2. 确保该段序列不形成α-helix;3. N、C端的肽段优于中间肽段;4. 避免重复或接近重复的序列;5. 避免同源性过高的肽段;6. 若需交联,应选择对产生抗体影响较小的一端;7. 选择序列中不应有过多的脯氨酸(Pro),但一两个脯氨酸有助于提高肽链的结构稳定性,有利于产生特异性抗体。

在关注生物医疗产品的研发与应用时,Z6·尊龙凯时始终致力于提供高质量的抗体制备方案,确保在临床与科研中的可靠性与准确性。